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液相色譜柱的選擇從哪些方法和條件入手

更新時(shí)間:2020-02-26      瀏覽次數(shù):2476
  HYPERCARB液相色譜柱內(nèi)保存溶劑和儀器系統(tǒng)內(nèi)存留溶劑,如果和流動(dòng)相不匹配,使用前需進(jìn)行轉(zhuǎn)換。特別是流動(dòng)村j含緩沖鹽時(shí),如保存溶劑足純有機(jī)相或有機(jī)相比例高,直接將新柱接人使用,會(huì)導(dǎo)致緩沖鹽在柱內(nèi)結(jié)晶析出,造成柱頭堵塞。建議儀器和色譜柱經(jīng)常使用,用10%的有機(jī)溶劑保持即可。
 
  日常分析工作中,我們使用的流動(dòng)栩和待測(cè)樣品應(yīng)用0.45pm濾膜過(guò)濾后再連接或注入到色譜儀上。對(duì)于有機(jī)相比例高的流動(dòng)栩可以一起過(guò)濾出來(lái)備用,但是有機(jī)相比例小的流動(dòng)相一定要現(xiàn)用現(xiàn)濾,分析結(jié)束時(shí)一定要先用10%的有機(jī)溶劑沖洗管路及色譜柱,為有機(jī)相少的流動(dòng)相容易滋生細(xì)菌,造成色譜柱堵寒,影響色譜柱性能。
 
  短期保存(隔夜或隔周末)用所用的流動(dòng)相(不含緩沖鹽)保存為佳,以盡量減少下次使用的平衡時(shí)間。一般只建議在長(zhǎng)期保存反相柱的時(shí)候用純醇或乙腈,使用80%左右有機(jī)相保存也屬好的選擇,且足以避免長(zhǎng)菌。強(qiáng)烈建議在柱身上貼標(biāo)簽標(biāo)明保存溶劑。離子交換柱和水性凝膠柱等適合保存在水溶液中的色譜柱,可加0.05%溶液防止K菌。正相柱無(wú)論是短期還足長(zhǎng)期,都推薦保存住所用流動(dòng)相巾。
 
  HYPERCARB液相色譜柱選擇的方法和條件
 
 ?、偬盍匣|(zhì)
 
  a.硅膠基質(zhì):純度高本錢(qián)低,強(qiáng)度大,化學(xué)修飾輕易,但pH值范圍有限。大多硅膠基質(zhì)填料在pH2-8之間穩(wěn)定,但經(jīng)過(guò)特殊修飾的硅膠鍵合相可以穩(wěn)定在pH1.5-10。
 
  b.聚合物基質(zhì):應(yīng)用pH值范圍寬,溫度穩(wěn)定(高溫可以達(dá)到80度以上),機(jī)械強(qiáng)度小。
 
 ?、陬w粒外形
 
  大多現(xiàn)代HPLC填料都是球形顆粒,但有時(shí)是不規(guī)則的顆粒。球形顆粒提供較低的柱壓、較高的柱效和穩(wěn)定性以及較長(zhǎng)的柱壽命在使用高粘度的活動(dòng)相時(shí);不規(guī)則顆粒有較大比表面積和相對(duì)低廉的價(jià)格。
 
 ?、垲w粒粒徑
 
  粒徑越小柱效越高、分離度越高,但同時(shí)會(huì)導(dǎo)致較高柱壓降。選擇1.5-3μm的填料以解決一些復(fù)雜樣品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱。
 
 ?、芎剂?br /> 
  含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例,與比表面積和鍵合覆蓋度等有關(guān)。高含碳量進(jìn)步柱容量、分辨率及分析時(shí)間,用于要求高分離度的復(fù)雜樣品;低含碳量分析時(shí)間短、展現(xiàn)不同的選擇性,用于快速分析簡(jiǎn)單樣品及需要高含水活動(dòng)相條件的樣品。一般C18的含碳量在7-19%不等。
 
 ?、菘讖胶捅缺砻娣e
 
  HPLC吸附介質(zhì)是多孔的顆粒,盡大多數(shù)的反應(yīng)表面于孔內(nèi)。因此,分子必須進(jìn)進(jìn)孔內(nèi)才能被吸附和分離。
 
  孔徑和比表面積是相輔相成的兩個(gè)概念。孔徑小比表面積大,反之亦然。比表面積大,增加樣品與鍵合相之間的反應(yīng),增加保存,上樣量和復(fù)雜成分的分離度;比表面積小,平衡時(shí)間快,適合梯度分析。
 
  ⑥孔容和機(jī)械強(qiáng)度
 
  孔容,又稱“孔體積”。指單位顆粒的空隙體積大小。它能很好的反應(yīng)填料的機(jī)械強(qiáng)度??左w積大的填料相對(duì)孔體積小的填料機(jī)械強(qiáng)度要略弱??左w積為1.5mL/g或更小的填料大多用于HPLC分離,而孔體積大于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色譜和低壓色譜。
 
 ?、叻舛朔舛?br /> 
  封端能夠降低極性堿性化合物由于與裸露的硅醇基相互作用而產(chǎn)生的拖尾峰。不封端鍵合相相對(duì)封端鍵合相會(huì)產(chǎn)生不同的選擇性,尤其是極性樣品。
 
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